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非乙酰化cAMP/cGMP ELISA試劑盒;G蛋白激活檢測抗體;點突變系列抗體火爆熱銷及隆重招商!!!

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如何定量檢測cAMP和cGMP

如何定量檢測cAMPcGMP

背景介紹

1958Sutherland發現了cAMP(環磷酸腺苷),并因此獲得了1971年諾貝爾生理與醫學獎[1]. 1963Ashman發現了cGMP(環磷酸鳥苷)[2]50年過去了,人們已明白cAMPcGMP是在很多生理過程中發揮重要調節作用的第二信使分子。鳥苷酸環化酶可將GTP催化生成cGMPcGMP可以被磷酸二酯酶水解成GDP激活鳥苷酸環化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加細胞內cGMP的含量。cGMP特異性磷酸二酯酶的抑制劑被用來治療人類的某些疾病,比如cGMP特異性磷酸二酯酶類型5的抑制劑(偉哥和西力士)被用來治療ED勃起功能障礙);腺苷酸環化酶將ATP催化生成cAMPcAMP可以被磷酸二酯酶水解成ADP激活腺苷酸環化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加細胞內cAMP的含量。苷酸環化酶激活受體的阻斷劑和cAMP特異性磷酸二酯酶的抑制劑被用來治療人類的某些疾病,比如針對升高cAMP水平的b-腎上腺素受體的阻斷劑被用于治療心律失常高血壓心肌梗塞和心力衰竭等疾病。

在五十年的研究歷程中,從開始研究cAMPcGMP在各種生理過程中的調節作用,到近幾年與之相關的藥物研發,藥物篩選領域,人們一直在努力尋找一種快速靈敏特異性和可重復地定量檢測cAMPcGMP含量的方法

檢測方法演變

cAMPcGMP分子量分別只有329.21345.21,在機體內的含量極低,為p mol/L級別,用一般的分析方法無法測定。70年代一系列測定cAMPcGMP的方法被發明出來,最基本的原理有三種:分別是競爭性蛋白質結合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄層色譜法[5]。在80年代,放射性免疫分析法得到了廣泛的應用和改進,由于這種方法采用放射性核素標記,應用范圍受到一定限制,為了進一步提高檢測的靈敏度和操作的安全性,進入90年代又陸續發明了各種酶標記法和化學發光法的競爭性ELISA檢測試劑盒,這一類檢測方法的根本原理是基于抗體抗原的免疫反應,所有這些試劑盒中采用的抗體全部是兔血清或者是經過特異親和提純之后的cAMPcGMP兔多抗,毫無疑問,兔多抗在約四十年的cAMPcGMP定量檢測中做出了巨大貢獻,但同時它也有著明顯的缺陷:

1,兔多抗對cAMPcGMP的特異性不高,會與其他核苷類似分子發生交叉反應,盡管可以通過特異親和提純降低交叉,但仍然無法消除交叉;

2兔多抗對cAMPcGMP的親和力受高濃度的價陽離子(比如Mg2+Ca2+的影響

3,兔多抗在制備的過程中存在個體差異和批間差異,難以保證檢測數據的重復性;

4,兔多抗試劑盒在cAMPcGMP樣品的處理上也需要進行乙酰化處理,這與兔多克隆抗體制備方法有必然關系,如果不乙酰化將無法達到檢測所需的靈敏度。

所以無論標記方法如何革新,不改進抗體,仍然不能從根本上迎來cAMPcGMP定量檢測的變革。

cAMPcGMP單克隆抗體成功開發

NewEast Biosciences(紐斯特)公司的科學家經過兩年的研發,篩選了4萬多個克隆,終于從中發現了高特異性,高親和力的cAMPcGMP單克隆抗體。并成功構建了世界上唯一的基于單抗的cAMPcGMP ELISA檢測試劑盒這個cAMPcGMP單抗對非乙酰化的cAMPcGMP的特異性識別能力是其對cGMPcAMPATPGTP以及其他核苷類似物識別能力108倍以上,這相比于以往的多抗試劑盒大大提高了cAMP (cGMP) 檢測的靈敏性和特異性,并且極大的降低了試劑盒的批間差異,提供了長久有效地可重復性檢測,也徹底擺脫了繁瑣的乙酰化過程和對科研人員健康不利的乙酰化揮發試劑

    該試劑盒一經推出,得到了學術界的廣泛認可,幾年來陸續發表論文十多篇。

已發表論文:

1. Castro, L. R., J. Schittl, et al. (2010). "Feedback control through cGMP-dependent protein kinase contributes to differential regulation and compartmentation of cGMP in 
rat cardiac myocytes." Circ Res 107(10): 1232-1240.

2. Guo, D., J. J. Zhang, et al. (2009). "Stimulation of guanylyl cyclase-D by bicarbonate." Biochemistry 48(20): 4417-4422.

3. Long, Y., Q. Li, et al. (2011). "Molecular analysis, developmental function and heavy metal-induced expression of ABCC5 in zebrafish." Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol 158(1): 46-55.

4. Tseng, K. Y., A. Caballero, et al. (2011). "Inhibition of Striatal Soluble Guanylyl Cyclase-cGMP Signaling Reverses Basal Ganglia Dysfunction and Akinesia in Experimental 
Parkinsonism." PLoS One 6(11): e27187.

5. Zhang, Y., Y. Sun, et al. (2011). "Molt-inhibiting hormone from Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis): Cloning, tissue expression and 
effects of recombinant peptide on ecdysteroid secretion of YOs." Gen Comp Endocrinol 173(3): 467-474.

6. Zheng, X., L. Ying, et al. (2011). "Role of sulfhydryl-dependent dimerization of soluble guanylyl cyclase in relaxation of porcine coronary artery to 
nitric oxide." Cardiovasc Res 90(3): 565-572.

7. Tsai, E. J., Y. Liu, et al. (2012). "Pressure-overload-induced subcellular relocalization/oxidation of soluble guanylyl cyclase
 in the heart modulates enzyme stimulation." Circ Res 110(2): 295-303.

8. Andre, L., J. Fauconnier, et al. (2012). "Subendocardial Increase in
 Reactive Oxygen Species Production Affects Regional Contractile 
Function in Ischemic Heart Failure." Antioxid Redox Signal.
 

9. Makiya, M., M. Dolan, et al. (2011). "Structural basis of anthrax 
edema factor neutralization by a neutralizing antibody." Biochemical 
and Biophysical Research Communications.
 ???

10. Skrabalova, J., J. Neckar, et al. (2012). "Antiarrhythmic effect of
 prolonged morphine exposure is accompanied by altered myocardial
 adenylyl cyclase signaling in rats." Pharmacol Rep 64(2): 351-359.

11. Ying, L., X. Xu, et al. (2012). "Heterogeneity in relaxation of 
different sized porcine coronary arteries to nitrovasodilators: role 
of PKG and MYPT1." Pflugers Arch 463(2): 257-268.

參考文獻:

1, Sutherland, et al. Cyclic AMP. Academic Press. Science 174, 392 (1971).

2, Ashman, et al, Biochem Biophys Res Commun, 11, 330 (1963).

3, Honma, M. et al., Biochem. Med.,18, 257 (1977).

4,Goldberg, M. L., Clin. Chem., 23, 576 (1977).

5, Trifilo, R. M. et al., J. Chromatogr., 116, 465 (1976).

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